1、多肽合成
按照多肽合成常規操作合成多肽，HPLC檢測純度為95%。多肽C端增加的半胱氨酸殘基用于以其巰基連接于偶聯劑上。
2、合成多肽與載體的偶聯
載體蛋白選擇 BSA/KLH（這里以BSA為例），用 SPDP連接法將合成的多肽與 BSA 進行偶聯：4.6mg SPDP 溶解于 740ul DMSO，終濃度為 20mM。0.1008g BSA 溶解于 2ml PBS-EDTA 溶液中，室溫靜置1h。使用脫鹽柱洗脫多余的 SPDP。4mg 多肽加入偶聯好的 BSA-SPDP 體系中室溫過夜。
3、多抗的制備
選體重 1. 5～2 kg 的健康雄性新西蘭大白兔， 按常規操作卡介苗活化其免疫系統。 將偶聯的 BSA多肽過濾除菌，100mg（2ml）加等體積的不完全佐劑，充分混懸。在新西蘭大白兔背部多點皮下注射，4 周后加強免疫，其后每隔 2 周進行 1 次加強免疫，注射途徑與初次免疫相同，共兩次后，檢測效價。耳源靜脈采血、分離血清。
4、多抗的純化
Protein G 柱分離純化 IgG 抗體：PBS pH7.4 平衡 Protein G 親和柱，以 0.1M Gly-HCl pH3.0洗脫， PBS pH7.4透析，分裝，-20℃保存。
抗原親和純化：1mM 預冷的 HCl 充分膨脹 Sepharose 4FF后，15個體積的 1mM HCl清洗去殘留的蔗糖，每次清洗 2min。偶聯緩沖液 0.1M NaHCO3 pH8.3 0.5M NaCl 平衡2次。多肽溶于偶聯緩沖液，調節pH值到pH8.3后，加入凝膠，室溫混旋 3h。加入1M預冷的乙醇胺混旋2h阻斷未偶聯上的活化位點。 50mM Tris-HCl pH8.0，1MNaCl 溶液與 50mM Gly-HCl pH3.5，1M NaCl 交替清洗8次。PBS緩沖液平衡10 倍體積。裝柱，平衡，上樣后以 0.1M Gly-HCl pH2.2 洗脫，PBS 透析，分裝，-20℃凍存。
5、抗體效價的檢測
抗體效價的檢測有ELISA方法或免疫雙擴散法，這里以免疫雙擴散法為例。
在制備的瓊脂板上按 7 孔一組的梅花形打孔（中間1孔，周圍6孔）孔徑約 5mm，孔距 2mm~5mm， 吸取多肽抗原懸液滴入中間孔，等倍稀釋的血清分別加入外周的對稱孔中。37℃溫箱中作用，于 24h 后觀察結果。 以出現沉淀帶的血清最高稀釋倍數為該血清的瓊擴效價。
