??? ?簡介
??? ?突觸后致密區 (PSD)
??? ?PSD95 (SAP90)
??? ?The PSD95 FluoTag
??? ?The PSD95 sdAb - FluoTag-X2 – 所有變異型
??? ?文獻
NanoTag Biotechnologies 和 Synaptic Systems 介紹了第一個PSD95 FluoTag-X2 抗體，它在標準免疫染色應用方面例如免疫組織化學(IHC) (圖1) 和免疫細胞化學(ICC) (圖 2)展現出了穩固而可靠的結果。并且，在附加的抗原提取步驟中，它對經PFA / 福爾馬林固定的，來源于大鼠和小鼠的組織和細胞沒有任何的要求。
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| 圖1：用FluoTag-X2 抗-PSD95磺化Cy 3 抗體(cat. no. N3702-SC3-L,稀釋比例1 : 500, 紅色)，對自由浮動的經PFA固定的大鼠海馬體的振動切片進行間接免疫染色。細胞核由DAPI染色可見為藍色。 |
圖2：用FluoTag-X2 抗-PSD95-ATTO 542 抗體(cat. no. N3702-At542-L, 紅色)和FluoTag-X2 抗-GFAP-At488抗體 (cat. no. N3802-At488-L, 綠色)，對經PFA固定的大鼠海馬體神經細胞和星形膠質細胞進行間接免疫染色。細胞核由DAPI染色可見為藍色 |
突觸后致密區 (PSD) 是位于突觸后膜，并列于突觸前活躍區的一個特殊蛋白致密區。起初，通過電子顯微鏡，他被鑒定為位于突觸后膜上的電子致密結構(圖3)。突觸后致密區在突觸間隙充當支架結構，使神經遞質受體聚集在靠近突觸前釋放神經遞質的位置(Banker et al., 1974; Ziff, 1997; Dosemeci et al., 2016)。
由于大腦區域，活躍狀況，突觸成熟和一些神經變性的疾病，突觸后致密區的大小和成分也有所不同(Meyer et al., 2014; Vyas and Montgomery, 2016)
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圖3：大鼠海馬結構突觸的電子顯微斷層掃描圖片 N. Holderith PhD 博士生 Laboratory of Cellular Neurophysiology, Institute of Experimental Medicine Budapest |
PSD95 (突觸后致密區蛋白 95) 也稱為SAP90 (突觸關聯蛋白 90)或者由DLG4基因編碼的Disks large homolog 4 (Statthakis et al., 1997)。
與其鄰近親屬PSD93, SAP102和SAP97，一同屬于MAGUK 蛋白超級家族，并且共享PDZ, SH3和GUK結構域的特性(Woods and Bryant, 1993) (見圖4)。
| 圖4：PSD95蛋白的3D結構?；赑yMOL 上對PDB 1be9的描述。 |  |
PSD95和PSD93 是PSD的關鍵組分(Hunt et al., 1996; Kennedy, 1997)，可以形成包含數百個拷貝的多聚體支架，聚集神經遞質受體、離子通道和其他伴隨的信號蛋白。
出于此原因， PSD95是一個重要的，常用的標記蛋白，用于神經系統中突觸后端的特定免疫標記，包括免疫細胞化學 (ICC)和免疫組織化學(IHC)。然而，由于多聚體的，緊湊且致密的結構，抗體表位經常被巨大的完整IgG抗體分子所掩蓋或由于空間位阻而難以接近?？乖迯头椒ɑ蛘咛厥庹{整過的固定實驗方案可以改善結果，但由于附加的組織處理步驟，對于其它抗體在多路復用實驗中的應用可能會是一個限制。
新的PSD95 FluoTag N3702是一個單域抗體(sdAb)，通常被稱為納米抗體，由我們的合作伙伴公司NanoTag Biotechnologies所研制開發。這種重組駱駝源抗體僅由羊駝重鏈抗體的一個抗原結合位點組成。只有約僅僅15 kDa，這種FluoTag比傳統的IgG抗體分子大約小10倍。由于非常小的尺寸，即使在標準的4% PFA灌注固定和后固定組織中，這種PSD95 FluoTag也可以穩定地訪問其表位。這種組織制備方法由于確保了組織形態的極佳保存，并與大量可用的研究抗體兼容，所以通常用于振動和冷凍切片的免疫組化染色。
此外，在對人工培養神經元細胞的免疫組化染色中發現，新引入的PSD95 FluoTag在經PFA固定的細胞上表現卓越(圖 2)。
它的單價結合特性，即每個FluoTag與確定數量的熒光團分子結合，使其成為定量分析的理想試劑。
為了確保最大范圍的應用符合您的需求，我們新的PSD95 FluoTag可與一個廣泛的熒光分子團共軛(見下表)
PSD95 sdAb - FluoTag-X2 - 所有變異型
| 貨號 | 產品描述 | 應用 | 規格 |
|---|---|---|---|
| N3702-AF568-L | PSD95 sdAb, camelid, monoclonal,
FluoTag-X2, AZdye 568 |
WB ICC IHC | 200 μl |
| N3702-AF647-L | PSD95 sdAb, camelid, monoclonal,
FluoTag-X2, Alexa 647 |
ICC IHC | 200 μl |
| N3702-At488-L | PSD95 sdAb, camelid, monoclonal,
FluoTag-X2, ATTO 488 |
ICC IHC | 200 μl |
參考文獻
Banker et al. 1974: Proteins of the postsynaptic density. PMID: 4419608
Dosemeci et al. 2016: The Postsynaptic Density: There Is More than Meets the Eye. PMID: 27594834
Hunt et al. 1996: PSD-95 is associated with the postsynaptic density and not with the presynaptic membrane at forebrain synapses. PMID: 8778289
Kennedy 1997: The postsynaptic density at glutamatergic synapses. PMID: 9185308
Meyer et al. 2014: Balance and stability of synaptic structures during synaptic plasticity. PMID: 24742464
Statthakis et al. 1997: Human postsynaptic density-95 (PSD95): location of the gene (DLG4) and possible function in nonneural as well as in neural tissues. PMID: 9286702
Vyas and Montgomery 2016: The role of postsynaptic density in neural degeneration and regeneration. PMID: 27482211
Woods and Bryant 1993: ZO-1, DlgA and PSD-95/SAP90: homologous proteins in tight, septate and synaptic cell junctions. PMID: 8155583
Ziff 1997: Enlightening the postsynaptic density. PMID: 9427241
